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【用户成果】Sony ID7000™助力免疫信号调控研究

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2025-04-18
海报分享


CD27是肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族成员,在初始CD8⁺ T细胞(Tn)中高表达,并参与T细胞记忆命运的决定。其配体CD70在抗原呈递细胞(APCs)上短暂诱导表达,与CD27结合后触发信号传导。先前研究表明,CD27通过NF-κB和Wnt通路调控T细胞存活和分化,但其与TCR/CD28信号的协同机制尚不明确。此外,CAR-T细胞疗法中过度的T细胞分化可能导致疗效下降,而CD27信号可能通过维持记忆表型改善治疗效果。


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研究主要发现




1.CD27的快速内吞与降解

  • CD27与CD70结合后,通过网格蛋白介导的内吞(CME)迅速内化,随后通过溶酶体和蛋白酶体途径降解。

  • 内吞依赖αCD3共刺激,且在记忆T细胞亚群中内吞效率降低。

图1.CD70配体结合诱导表面CD27受体快速下调。



2.CD27-TRAF2-SHP-1信号轴调控TCR/CD28信号

  • CD27内吞后募集TRAF2和磷酸酶SHP-1,抑制Lck激酶(TCR信号关键分子)的Y394位点磷酸化,从而减弱ERK1/2和AKT信号。

  • 该调控依赖于SHP-1活性,CRISPR敲除SHP-1后CD27对ERK的抑制作用消失。

图2. CD27-TRAF2-SHP-1调节αCD3+αCD28诱导的Lck和下游信号传导。



3.记忆表型与代谢适应

  • CD27共刺激延缓细胞周期进入,促进TCF1⁺、CD45RA⁺、CCR7⁺的记忆T细胞表型。

  • CD27激活的T细胞糖酵解水平较低,但线粒体呼吸能力增强,代谢特征更接近记忆T细胞。

图3. CD27共刺激促进记忆特征。



4.转录与表观遗传重塑

  • 单细胞多组学分析显示,CD27共刺激诱导FOXP1、TCF7、STAT1等记忆相关转录因子网络,抑制效应分化相关基因(如IL2、IFNγ)。

  • ATAC-seq表明CD27信号维持染色质开放性,增强记忆相关基因的调控元件可及性。

图4. CD27共刺激在T细胞活化后早期诱导不同的基因调控回路。



5.CAR-T细胞疗效提升

  • CD27共刺激的CAR-T细胞在慢性抗原刺激模型中持久性更强,B细胞再生障碍维持更久。

  • 在实体瘤模型中,CD27共刺激的CAR-T细胞连续杀伤能力增强,抑制标志物(TIM3、TIGIT)表达更低。

图5. CAR-T细胞在制造过程中的CD27共刺激改善了体内功能。

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索尼ID7000™

全光谱细胞分析仪




1.CD27表面表达动态分析


方法:使用抗CD27抗体(克隆MT-271)结合不同激活条件(αCD3/CD28/CD70DT),通过流式检测CD27内吞速率。

结果:CD70DT诱导剂量依赖性CD27内吞,5分钟内表面表达显著下降,24小时后出现28 kDa裂解产物。



2.细胞周期与表型分析


方法:CFSE稀释法评估增殖;7-AAD染色分析细胞周期;表面标记(TCF1、CD45RA、CD127)检测记忆表型。

结果:CD27共刺激延迟细胞周期进入(48小时S/G2+M比例较低),但9天后扩增的T细胞中TCF1⁺比例显著高于CD28共刺激组。



3.磷酸化信号检测


方法:固定/透膜后,使用抗p-ERK(T202/

Y204)、p-Lck(Y394)抗体进行胞内染色。

结果:CD27共刺激显著降低ERK和Lck磷酸化水平,SHP-1抑制剂可逆转此效应。

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研究结论


CD27信号通过TRAF2-SHP-1轴动态调控TCR/CD28信号强度,平衡效应与记忆分化。CD27共刺激的CAR-T细胞具有更强的持久性和抗肿瘤活性,尤其在慢性抗原和实体瘤模型中表现突出。靶向CD27的信号调控为优化T细胞疗法(如减少耗竭、增强记忆)提供了新策略,可能改善临床疗效。

意义:本研究揭示了CD27在T细胞命运决定中的核心机制,为设计新型CAR-T制备方案提供了理论依据,具有重要转化价值。

Reference:

Signaling via a CD27-TRAF2-SHP-1 axis during naive T cell activation promotes memory-associated gene regulatory networks. Immunity. 2024 Feb 13;57(2):287-302.e12. doi: 10.1016/j.immuni.2024.01.011. 


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赋予深度科学洞察力


索尼ID7000™全光谱细胞分析仪赋予了科研人员深度的科学洞察力,它通过提供关于异质细胞群体的全面信息,支持高参数流式细胞术,并具有高灵敏度以检测微弱和稀有的细胞群体。该设备能够扩展细胞分析的能力,可以配置多达7个激光器和186个检测器,是目前市场上任何流式细胞仪中配置最多的。这使得研究人员能够进行50c+的实验,其限制仅在于可用的荧光素。ID7000™的激光选择范围广泛,从深紫外线(320nm)到红外(808nm)。系统的检测能力不仅支持多色方案的扩展,还能适应未来荧光素技术的发展。

更详细的产品信息可参考:

https://www.sonybiotechnology.com/us/instruments/id7000-spectral-cell-analyzer/

或热线电话联系我们:400-619-7910




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