【文献分享】Sony ID7000助力cDC2s异质性发育源头研究

传统树突细胞(cDCs)具有多种功能和表型，主要分为cDC1s和cDC2s。cDC2s进一步细分为依赖Notch、KLF4的亚群以及T-bet+和T-bet-的cDC2As和cDC2Bs。这些亚型的具体关系及其代表的细胞状态或亚群尚不明确。所有cDCs源自骨髓中的前体细胞pre-cDCs，它通过血液迁移到周围组织。本研究结果揭示cDC2As和cDC2Bs的命运决定从骨髓开始，并暗示cDC2s亚群是由发育谱系决定的，而非由周围组织环境所塑造的细胞状态，组织中的信号可能是允许性的而不是指导性的。

图1. cDC2A和cDC2B发育谱系示意图。

根据本文内容，cDCs定义为Lin-（CD3, Ly6G, Siglec-F, B220, CD19, Ly6D, NK1.1和Ter119）, CD64-/int, CD11c+, MHC-II+和CD26+。

本研究中，Sony ID7000超高参数全光谱流式细胞仪发挥了重要作用：

1. 细胞表面标记的分析：

   利用Sony ID7000对细胞表面标记物如CD11c、MHC-II、CD26、CD64、CD88、XCR1、SIRPα、Esam、CLEC12A、CD11b、CD43、CD135、CD117、Ly6C、CD8α等进行分析，鉴定不同的细胞亚群，如cDC1s（XCR1+）、cDC2s（SIRPα+）、pre-cDC1s和pre-cDC2s。

2. 细胞分化和成熟状态的评估：

   通过检测MHC-II、SIRPα和其他标记物的表达水平，评估pre-cDCs向cDCs分化的过程。

3. 细胞转移实验：

   将分选的pre-cDC2s亚群通过尾静脉注射到亚致死剂量辐照（sublethally irradiated）的受体小鼠中，并在3或6天后分析脾细胞。

4. 细胞增殖评估：

   通过注射EdU并使用Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647 Flow Cytometry Kit进行检测，评估细胞增殖。

5. 细胞刺激实验：

   对分选的Pre-cDC2s和cDC2s群体进行不同刺激物（如flagellin、R848、CpG ODN 1668和zymosan）的刺激，并使用流式细胞术分析进行后续分析。

6. 细胞表面标记物的流式细胞术验证：

   使用流式细胞术验证scRNA-seq数据中识别的细胞亚群特异性标记物的表达。

这些实验内容展示了Sony ID7000超高参数全光谱流式细胞仪在免疫细胞分析中的广泛应用，包括细胞亚群的识别、分化状态的评估、细胞增殖和功能分析等。

图2. 脾脏中的常规树突细胞（cDC2s）门控策略。

图3. 使用流式细胞术和UMAP分析鉴定骨髓中的pre-cDCs亚群，通过特定标记物区分pre-cDC1s、pre-cDC2As和pre-cDC2Bs的表达特征。

图4. 骨髓中cDC2As和cDC2Bs谱系的特异性在物种间是保守的。

总结文中重要的科学发现：

1. cDC2s起源：cDC2s的异质性来自骨髓中的pre-cDC2s前体细胞，它们分为发展为cDC2As或cDC2Bs的两个亚群。

2. pre-cDC2s特征：骨髓中的Siglec-H+ pre-cDC2s发展为cDC2As，而Siglec-H− pre-cDC2s发展为cDC2Bs。

3. 发育轨迹：cDC2As和cDC2Bs的分化在骨髓中已开始，由前体细胞决定，不是由外周组织环境影响。

4. Notch信号重要性：Notch信号对cDC2As的分化至关重要。

5. 跨物种保守性：小鼠和人类中cDC2As和cDC2Bs的分化路径在进化上保持保守。

6. 骨髓标记：Siglec-H作为区分pre-cDC2As的潜在标记。

7. 基因表达特征：cDC2As和cDC2Bs前体细胞具有不同的基因表达模式。

8. 谱系追踪：遗传标记和谱系追踪技术确认cDC2As和cDC2Bs是不同的发育谱系。

9. 骨髓与外周组织关系：骨髓中的pre-cDC2s与外周组织中的cDC2As和cDC2Bs有直接联系。

这些发现有助于我们更好地理解cDC2s细胞的发育，并为免疫治疗提供新思路。

Reference

Minutti CM, Piot C, Pereira da Costa M, Chakravarty P, Rogers N, Huerga Encabo H, Cardoso A, Loong J, Bessou G, Mionnet C, Langhorne J, Bonnet D, Dalod M, Tomasello E, Reis E Sousa C. Distinct ontogenetic lineages dictate cDC2 heterogeneity. Nat Immunol. 2024 Mar;25(3):448-461. doi: 10.1038/s41590-024-01745-9. Epub 2024 Feb 13. PMID: 38351322; PMCID: PMC10907303.