五分钟了解如何通过盘古qPCR仪进行KASP基因分型检测

设计对应的探针与引物，引物一共是三条，两条带有荧光接头的分型上游及一条通用下游（下图A）。探针一共是四条，两条荧光探针和两条淬灭探针（下图B），荧光探针与淬灭探针是互补的，且荧光探针是与特异性上游引物的接头部分序列(tag sequence)一致。

通过qPCR仪进行PCR扩增。在第一轮PCR扩增中，等位基因特异引物(3'末端能配对的)就可识别特定等位基因模板，完成等位基因识别，反向通用引物也会结合并完成整个PCR过程，在此阶段，荧光标记的探针仍与其互补的淬灭探针结合，并且不会产生荧光信号。从第二轮PCR扩增开始，产物中出现携带通用标签序列(tag sequence)的模板，这步完成把通用标签序列引入与SNP对应的PCR产物中。随后携带荧光的探针通过与tag互补的DNA链结合而添加到PCR产物中，因此不再与其互补的淬灭探针结合，从而产生荧光信号。

盘古qPCR检测运行后，在SNP分析菜单下获取KASP数据。

•升温速度可达8.5℃/s，一次快速完成96个基因分型反应并出具结果，产物得率高，特异性好

•温控精度±0.1℃满足KASP对扩增温度的严苛要求，确保识别单个碱基差异的特异性

•支持12列温度梯度功能，便于快速优化KASP扩增所需条件

•光波导顶部检测，无边缘效应和光程差，无需校准

•6色检测通道，支持各种常用荧光标记，兼容常用KASP分型试剂盒