【文献分享】SONY MA900助力免疫检查点抑制剂引起自身免疫性溶血性贫血的机制研究

免疫检查点抑制剂（ICPi，Immune checkpoint inhibitors）对肿瘤免疫疗法起到了革命性推动作用，但是同时也会引起自身免疫疾病，例如自身免疫性溶血性贫血（AIHA）。ICPi疗法引起AIHA的免疫机制目前尚不清楚。

美国哥伦比亚大学欧文医学中心的Krystalyn E. Hudson研究团队在小鼠模型中发现FoxP3+和Tr1两种T细胞亚群降低以及促炎TH1和TH17细胞增加可以促进ICPi-AIHA的发生。同时发现了一种新的CD39单阳性T细胞亚群（CDSP），这种细胞类群可以预测ICPi疗法引起的AIHA。研究进一步证实腺三磷双磷酸酶（Apyrase）作为一种新的治疗药物可以有效缓解ICPi引起的AIHA。

1、红细胞自身反应性CD4+ T细胞耐受涉及检查点分子、Treg发育：

RNA测序结果表明自反应小鼠的耐受CD4+ T细胞可以显著上调检查点分子（PD1, Lag-3和CTLA-4）、 免疫抑制细胞因子、嘌呤能信号分子（CD39和CD73），以及Treg相关的转录因子。以上转录因子和可溶介质的富集与已知的两种Treg细胞（FoxP3+ Treg细胞和Tr1 Treg细胞）表现具有一致性。FoxP3+ Treg细胞分泌免疫抑制剂IL-10和转化生长因子，Tr1 Treg细胞表达Eomes、c-MAF、Egr2和IRF4并分泌颗粒酶K和干扰素γ（IFN γ）。      

2、ICPi可逆转对红细胞自体抗原耐受，并引起AIHA

ICPi治疗的HOD+OTII+小鼠表现出高水平的红细胞自体抗体，同时引起红细胞压积和血红蛋白降低，血清胆红素升高以及网状细胞增多。另外，ICPi治疗的小鼠表现出FoxP3+ Treg细胞和Tr1 Treg细胞降低，而促炎性FN-γ+ TH1 和IL-17+ TH17 细胞增加。

3、CD39SP可以预测红细胞耐受失败

研究发现在ICPi治疗的小鼠中，部分CD4+ T细胞只表达CD39。而CD39+细胞不表达FoxP3，也不表达Lag-3和CD49b，表明这群细胞不是Treg细胞。因此将这组CD4+CD39+CD73−FoxP3–CD25–细胞命名为CD39单阳性细胞，即CD39SP。

ICPi治疗小鼠后，对外周血中CD39细胞群进行了持续监测。研究发现CDSP细胞在ICPi治疗七天后出现，并且可以在确定红细胞自体抗体产生前检测到CDSP细胞群。实验表明CDSP细胞群可以作为一种生物标志物来预测红细胞自体抗体的产生。在AIHA病人样本中也发现，CDSP细胞群升高。

4、腺三磷双磷酸酶（Apyrase）治疗可以缓解ICPi引起的AIHA

胞外ATP（eATP）作为一种促炎信号可以促进自体免疫。腺三磷双磷酸酶（Apyrase）可以降解eATP，进而降低红细胞自体抗体水平。与对照组相比，注射腺三磷双磷酸酶（Apyrase）的小鼠在ICPi处理后表现出红细胞自体抗体水平降低，红细胞压积升高，以及CD39SP细胞群降低。对于已经产生红细胞自体抗体的小鼠，腺三磷双磷酸酶（Apyrase）治疗不能降低溶血和自体抗体水平，但是可以提高生存率。

索尼流式在研究中的工作：

1、作为全自动分选技术的开创者和领导者，SONY MA900采用创新的微流控技术，高活性分选获得CD4+ T细胞应用于RNA测序，同时也用于分选CD39SP细胞，研究其激活B细胞增殖，并持续引发AIHA。

2、SONY全自动流式分选仪已超高的智能化设计实现便捷操作、以微流控芯片等创新技术实验高纯度、高活性目标细胞分选，同时对ICPi小鼠各类免疫细胞进行高灵敏度、高分辨率的鉴定和功能分析。