• 品牌中心
  • 分子靶点质谱筛选服务
  • 分子靶点质谱筛选产品
  • 应用中心
  • 关于我们
  • 联系我们

探索所有品牌

Molecular Devices
高内涵成像分析系统
多功能酶标仪
单功能酶标仪
类器官工作站
克隆筛选
钙流检测工作站
Sony
分析型流式细胞仪
分选型流式细胞仪
全封闭流式细胞分选仪
ECHO
正倒置一体显微镜
Countstar
细胞计数仪
高通量细胞分析仪
Hvita
Lonza
4D-Nucleofector™
Aperbio
qPCR仪和PCR仪
核酸电泳
蛋白转印
化学发光成像仪
Stilla
数字PCR系统
Seer
高深度血浆蛋白质组学系统
ProteinSimple
Vision Engineering
数码裸眼3D体视显微镜系统
高效率无目镜体视显微镜
人机工效学体视显微镜
ESCO
样本制备
样品培养
样品保存
样品分析
旻泉(Minquan)
叠加式振荡培养箱
通用型振荡培养箱
哺乳动物细胞振荡培养箱
达科为(DAKEWE)
冰冻切片室
组织脱水室
技术制片室
博鹭腾(BLT)
活体成像
分子影像
ZIRCON
无标记活细胞显微成像系统
血浆蛋白质组高深度检测
血浆与疾病
传统技术与挑战
Proteograph—技术平台
Proteograph—整体服务
Proteograph—DEMO数据下载
Protograph—“二代”升级产品线
蛋白质组差异谱质谱筛选
蛋白质样品—质谱鉴定分析
SILAC—细胞定量质谱分析
SILAC—外泌体定量质谱分析
LFQ—细胞/组织定量质谱分析
m6A修饰质谱定量分析
蛋白质互作质谱筛选
蛋白质互作 (PPI) 筛选—LFQ方案
蛋白质互作 (PPI) 筛选—SILAC方案
蛋白质互作 (PPI) 筛选—Crosslink方案
p3×FLAG-Bait 质粒构建&检测 (适配MG01/MG02 Kit)
蛋白质翻译后修饰质谱筛选
“靶”蛋白翻译后修饰 (PTMs) — 质谱分析
“泛”蛋白翻译后修饰 (PTMs) —质谱分析
小分子-靶点蛋白质谱筛选
小分子-靶点蛋白筛选 (Biotin tag)—LFQ方案
小分子-靶点蛋白筛选 (Biotin tag)—SILAC方案
小分子-靶点蛋白筛选 (Alkyne tag)—LFQ方案
小分子-靶点蛋白筛选 (Alkyne tag)—SILAC方案
小分子-靶点蛋白筛选 (Azide tag)—LFQ方案
小分子-靶点蛋白筛选 (Azide tag)—SILAC方案
小分子-靶点蛋白结合位点 (Binding sites) 检测
小分子化学修饰服务 (适配MG05~MG10 Kit)
DNA/RNA-互作蛋白质谱筛选
lncRNA-蛋白质互作—质谱分析
DNA-蛋白质互作—质谱分析
SILAC产品 (质谱级)
SILAC_DMEM Media Kit
SILAC_RPMI-1640 Media Kit
SILAC-labeled HEK-293T Cell Line
SILAC-labeled HEK-293T Cell Pellet
SILAC-labeled HEK-293T Proteome Digest
HEK-293T (适配MG系列产品)
分子互作富集试剂盒 (质谱级)
MG01:IP-MS 富集试剂盒 (3×FLAG tag)
MG02:SILAC-IP-MS富集试剂盒(3×FLAG tag)
MG03:Co-IP/Pull-down胶内酶解试剂盒(IGD)
MG05:SM-PD富集试剂盒(Biotin tag)
MG04:Co-IP/Pull-down溶液酶解试剂盒(ISD)
MG06:SM-PD富集试剂盒(Alkyne tag)
MG07:SM-PD富集试剂盒(Azide tag)
MG08:SILAC-SM-PD富集试剂盒(Biotin tag)
MG09:SILAC-SM-PD富集试剂盒(Alkyne tag)
MG10:SILAC-SM-PD富集试剂盒(Azide tag)
MG11:小分子-靶点蛋白结合位点质谱筛选试剂盒
MG12:PROTAC 分子靶标筛选试剂盒
MG13:细胞/组织差异蛋白质组样本制备试剂盒
MG系列-组合套装 (质谱级)
MG01:组合套装 (MG01 Suite)
MG02:组合套装 (MG02 Suite)
MG05:组合套装 (MG05 Suite)
MG06:组合套装 (MG06 Suite)
MG07:组合套装 (MG07 Suite)
MG08:组合套装 (MG08 Suite)
MG09:组合套装 (MG09 Suite)
MG10:组合套装 (MG10 Suite)
分子互作富集配套试剂(质谱级)
MGR01:考马斯亮蓝染色液 (适配MG系列产品)
MGR02:Bradford蛋白质定量试剂盒 (适配MG系列产品)
MG01/MG02配套试剂/耗材
MG05/MG08配套试剂/耗材
MG06/MG09配套试剂/耗材
MG07/MG10配套试剂/耗材
Molecular Devices
看见不同,挑选卓越——美谷分子重磅发布 QPix FLEX 微生物克隆筛选系统
【重磅】FDA 官宣逐步淘汰动物实验!美谷分子类器官解决方案助力药物研发新纪元
【精准医疗新突破】类器官药敏检测:让癌症治疗不再“试错”
客户成就 | 基于高内涵成像分析系统评价与表征蓝藻细胞特征
……
查看更多
Sony
【应用分享】索尼CGX10封闭式细胞分选系统:稀有亚群的GMP分选新标杆
基于ID7000™的首个 42 参数人全血免疫表型分析高维方案
基于ID7000™的首个小鼠高维胞内方案
【文献分享】Sony SH800助力iPSC悬浮培养技术新突破
……
查看更多
Vision Engineering
Lynx EVO助力提升干细胞研究
……
查看更多
数字PCR仪&荧光定量PCR仪
一步法多重荧光定量逆转录PCR检测4种水禽病毒
数字PCR应用分享| 数字PCR技术在脑动静脉畸形检测中的应用实践与前景展望
一步法多重荧光定量逆转录PCR检测4种水禽病毒
艾普拜生物:提供从定性到精准定量核酸分子检测全流程解决方案
……
查看更多
Countstar
【FDA重磅新政】减少动物试验,类器官引领新药研发新时代!— Countstar全流程解决方案
……
查看更多
公司概况

上海百翱杰生物科技有限公司(简称“百翱杰”)是一站式生命科学整体解决方案供应商,扎根于生命科学领域,坚持“服务为先”的理念和信念,以丰富的管线产品,专业的技术支持,完善的售后体系、专业的科研服务团队,为客户提供整体解决方案。

招贤纳士
销售代表
技术支持
快速链接
切片
id7000
显微镜
Confocal HTai
ImageXpress Co
上海百翱杰生物科技有限公司
  • 品牌中心
    返回主菜单
    品牌中心
    • Molecular Devices
      • 高内涵成像分析系统
      • 多功能酶标仪
      • 单功能酶标仪
      • 类器官工作站
      • 克隆筛选
      • 钙流检测工作站
    • Sony
      • 分析型流式细胞仪
      • 分选型流式细胞仪
      • 全封闭流式细胞分选仪
    • ECHO
      • 正倒置一体显微镜
    • Countstar
      • 细胞计数仪
      • 高通量细胞分析仪
      • Hvita
    • Lonza
      • 4D-Nucleofector™
    • Aperbio
      • qPCR仪和PCR仪
      • 核酸电泳
      • 蛋白转印
      • 化学发光成像仪
    • Stilla
      • 数字PCR系统
    • Seer
      • 高深度血浆蛋白质组学系统
    • ProteinSimple
    • Vision Engineering
      • 数码裸眼3D体视显微镜系统
      • 高效率无目镜体视显微镜
      • 人机工效学体视显微镜
    • ESCO
      • 样本制备
      • 样品培养
      • 样品保存
      • 样品分析
    • 锐思捷(RSJ)
      • 台式纯水/超纯水系统
      • 中央纯水系统
    • 旻泉(Minquan)
      • 叠加式振荡培养箱
      • 通用型振荡培养箱
      • 哺乳动物细胞振荡培养箱
    • 达科为(DAKEWE)
      • 冰冻切片室
      • 组织脱水室
      • 技术制片室
    • 博鹭腾(BLT)
      • 活体成像
      • 分子影像
    • ZIRCON
      • 无标记活细胞显微成像系统
  • 分子靶点质谱筛选服务
    返回主菜单
    分子靶点质谱筛选服务
    • 血浆蛋白质组高深度检测
      • 血浆与疾病
      • 传统技术与挑战
      • Proteograph—技术平台
      • Proteograph—整体服务
      • Proteograph—DEMO数据下载
      • Protograph—“二代”升级产品线
    • 蛋白质组差异谱质谱筛选
      • 蛋白质样品—质谱鉴定分析
      • SILAC—细胞定量质谱分析
      • SILAC—外泌体定量质谱分析
      • LFQ—细胞/组织定量质谱分析
      • m6A修饰质谱定量分析
    • 蛋白质互作质谱筛选
      • 蛋白质互作 (PPI) 筛选—LFQ方案
      • 蛋白质互作 (PPI) 筛选—SILAC方案
      • 蛋白质互作 (PPI) 筛选—Crosslink方案
      • p3×FLAG-Bait 质粒构建&检测 (适配MG01/MG02 Kit)
    • 蛋白质翻译后修饰质谱筛选
      • “靶”蛋白翻译后修饰 (PTMs) — 质谱分析
      • “泛”蛋白翻译后修饰 (PTMs) —质谱分析
    • 小分子-靶点蛋白质谱筛选
      • 小分子-靶点蛋白筛选 (Biotin tag)—LFQ方案
      • 小分子-靶点蛋白筛选 (Biotin tag)—SILAC方案
      • 小分子-靶点蛋白筛选 (Alkyne tag)—LFQ方案
      • 小分子-靶点蛋白筛选 (Alkyne tag)—SILAC方案
      • 小分子-靶点蛋白筛选 (Azide tag)—LFQ方案
      • 小分子-靶点蛋白筛选 (Azide tag)—SILAC方案
      • 小分子-靶点蛋白结合位点 (Binding sites) 检测
      • 小分子化学修饰服务 (适配MG05~MG10 Kit)
    • DNA/RNA-互作蛋白质谱筛选
      • lncRNA-蛋白质互作—质谱分析
      • DNA-蛋白质互作—质谱分析
  • 分子靶点质谱筛选产品
    返回主菜单
    分子靶点质谱筛选产品
    • SILAC产品 (质谱级)
      • SILAC_DMEM Media Kit
      • SILAC_RPMI-1640 Media Kit
      • SILAC-labeled HEK-293T Cell Line
      • SILAC-labeled HEK-293T Cell Pellet
      • SILAC-labeled HEK-293T Proteome Digest
      • HEK-293T (适配MG系列产品)
    • 分子互作富集试剂盒 (质谱级)
      • MG01:IP-MS 富集试剂盒 (3×FLAG tag)
      • MG02:SILAC-IP-MS富集试剂盒(3×FLAG tag)
      • MG03:Co-IP/Pull-down胶内酶解试剂盒(IGD)
      • MG05:SM-PD富集试剂盒(Biotin tag)
      • MG04:Co-IP/Pull-down溶液酶解试剂盒(ISD)
      • MG06:SM-PD富集试剂盒(Alkyne tag)
      • MG07:SM-PD富集试剂盒(Azide tag)
      • MG08:SILAC-SM-PD富集试剂盒(Biotin tag)
      • MG09:SILAC-SM-PD富集试剂盒(Alkyne tag)
      • MG10:SILAC-SM-PD富集试剂盒(Azide tag)
      • MG11:小分子-靶点蛋白结合位点质谱筛选试剂盒
      • MG12:PROTAC 分子靶标筛选试剂盒
      • MG13:细胞/组织差异蛋白质组样本制备试剂盒
    • MG系列-组合套装 (质谱级)
      • MG01:组合套装 (MG01 Suite)
      • MG02:组合套装 (MG02 Suite)
      • MG05:组合套装 (MG05 Suite)
      • MG06:组合套装 (MG06 Suite)
      • MG07:组合套装 (MG07 Suite)
      • MG08:组合套装 (MG08 Suite)
      • MG09:组合套装 (MG09 Suite)
      • MG10:组合套装 (MG10 Suite)
    • 分子互作富集配套试剂(质谱级)
      • MGR01:考马斯亮蓝染色液 (适配MG系列产品)
      • MGR02:Bradford蛋白质定量试剂盒 (适配MG系列产品)
      • MG01/MG02配套试剂/耗材
      • MG05/MG08配套试剂/耗材
      • MG06/MG09配套试剂/耗材
      • MG07/MG10配套试剂/耗材
  • 应用中心
    返回主菜单
    应用中心
    • Molecular Devices
    • Sony
    • Vision Engineering
    • 数字PCR仪&荧光定量PCR仪
    • Countstar
  • 关于我们
    返回主菜单
    关于我们
    • 公司概况
    • 招贤纳士
  • 联系我们
  • 仪器维修
快速链接
切片
id7000
显微镜
Confocal HTai
ImageXpress Co
百翱杰 应用中心Molecular Devices

利用高内涵筛选分析系统进行心肌细胞增殖分析

阅读数:0
2024-10-14
海报分享

* 文章来源于 Bio-protocol

摘

要


哺乳动物出生后心脏生长的方式由心肌细胞增殖逐渐转变为心肌细胞肥大,成年心脏受损后心肌细胞增殖不足以弥补丢失的心肌细胞,所以探究心肌细胞增殖机制对于受损心肌补充新的心肌细胞至关重要。磷酸化组蛋白 H3(pH3)在细胞有丝分裂过程中高表达,作为一种核分裂标志物,是检测心肌细胞增殖的常用指标。高内涵筛选分析技术是一种能够进行荧光显微成像和定量图像分析的自动化高通量筛选技术,能够将所得实验数据进行量化,更加清楚明了展现实验结果。在这里,我们使用高内涵筛选分析系统分析 pH3+ 阳性心肌细胞数量,以评估心肌细胞增殖的程度。


关键词:心肌细胞增殖,磷酸化组蛋白 H3(pH3),高内涵筛选分析系统




材料与试剂


1. 1 天、30 天龄 C57BL/6J 小鼠(维通利华)

2. 湿盒

3. 组化笔 (abcam, catalog number: ab2601)

4. 盖玻片 (世泰, catalog number: 10212450C)

5. 粘附载玻片 (世泰, catalog number: 188105)

6. 组织包埋盒 (世泰, catalog number: 31050102w)

7. PBS 缓冲液粉末 pH7.3 (中杉金桥, catalog number: ZLI-9062)

8. PBS 缓冲液 pH7.4 (gibco, catalog number: C10010500BT)

9. 4%多聚甲醛 (LEAGENE, catalog number: DF0135)

10. 50X EDTA 抗原修复液 (LEAGENE, catalog number: YB-23522-1)

11. DEPC 水 (LEAGENE, catalog number: NR0001)

12. Tween 20 (Biofroxx, catalog number: 1247ML500)

13. 山羊血清封闭液 (中杉金桥, catalog number: ZLI-9056)

14. Trito™ x-100 破膜液 (Sigma-Aldrich, catalog number: X100)

15. 抗体稀释液 (中杉金桥, catalog number: ZLI-9030)

16. pH3 抗体 (Millipore, 种属反应性: 小鼠, 人, catalog number: 06-570)

17. α-actinin 抗体 (Abcam, 种属反应性: 小鼠,大鼠,人, catalog number: ab9465)

18. Alexa Fluor 488 羊抗兔免疫荧光抗体 (Invitrogen, catalog number: A21206)

19. Alexa Fluor 594 羊抗鼠免疫荧光抗体 (Invitrogen, catalog number: A21203)





仪器设备


1. 全自动组织脱水机 (Leica, catalog number: ASP300S)

2. 包埋机 (Leica, catalog number: EG1150H)

3. 石蜡切片机 (Leica, catalog number: RM2235)

4. 展片机 (Leica, catalog number: HI1210)

5. 烤片机 (Leica, catalog number: HI1220)

6. 全自动染色机、封片机 (Thermo Fisher Scientific, catalog number: ClearVue+Gemini)

7. 超纯水设备 (Thermo Fisher Scientific, catalog number: 50136146)

8. 电磁搅拌器 (IKA, catalog number: MS100)

9. 脱色摇床 (海门麒麟医用仪器厂, catalog number: TS-2)

10. 涡旋振荡器 (Scientific Industries, catalog number: SI-0256)

11. 台式高速冷冻离心机 (Eppendorf, catalog number: 5804R)

12. 移液器 (Eppendorf)

13. 普通 4 °C 冰箱

14. 共聚焦显微镜 (Zeiss, catalog number: LSM 800)

15. 高内涵筛选分析系统 (Molecular Devices, catalog number: ImageXpress Micro)





软件


1. ZEN

2. MetaXpress




<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>

实验步骤

<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>

A


石蜡切片的制备


1. 1 天、30 天龄的 C57BL/6J 小鼠购买自北京维通利华公司;


2. 1 天龄小鼠置于冰上麻醉 2min,30 天龄小鼠按照 0.2ml/20g 注射浓度为 17.5 μg/ml 的三溴乙醇溶液进行麻醉。剪刀剪开小鼠胸腔部分皮肤和皮下组织肌肉层,镊子撑开胸腔,迅速剪下心脏和流出道置于预冷的 PBS 缓冲液中,剪掉血管连带的多余组织,排出心脏中的血液;


3. 4% 多聚甲醛中固定心脏组织。1 天龄小鼠心脏组织固定 24h,30 天龄小鼠心脏组织固定 48 h。固定结束后将心脏组织置于包埋盒中在流动水下冲水,去除心脏组织中的多聚甲醛液体;


4. 依据心脏组织大小使用全自动脱水机的不同程序进行脱水,样本依次置于 75%、85%、95% 和无水乙醇中,随后在二甲苯中透明,最后置于 60 °C 液态石蜡浸泡;


5. 使用石蜡包埋机将心脏组织按照胸腔中心脏位置摆放,利用石蜡将心脏组织固定于包埋盒中;


6. 蜡块置于冰冻机冷冻 1 小时,展片机预热温度至 45 °C,使用 Leica 石蜡切片机切至心脏最大面,使得心脏腔室完全暴露(图 1),随后按照 5 μm 厚度进行切割,使得组织切片完全粘附于载玻片,待用。


B


免疫荧光染色


1. 组织粘附的载玻片置于烤片机上 68 °C 烘烤 45min,防止脱片;


2. 载玻片依次放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各 10min,乙醇浓度为 100%、95%、80%、75%、50% 中水化 5min,蒸馏水洗 5min;


3. 提前配制 1× EDTA 抗原修复液(pH=9.0)于高压锅内煮沸,将心脏组织切片放入高压锅中,使得修复液完全覆盖组织切片,高温修复 2min,流动水下冲洗冷却 20min;


4. PBST 缓冲液冲洗 5min,2 次;PBS 缓冲液冲洗 5min,3 次;


5. 配制 0.3% 封闭通透液滴加在心脏组织切片上,室温孵育 1 h;


6. 抗体稀释液稀释 pH3 一抗与 α-actinin 一抗滴加到切片组织表面,4 °C 过夜;


7. 一抗孵育 16 h 后,室温复温 1 h;


8. PBST 缓冲液冲洗 5 min,2 次;PBS 缓冲液冲洗 5 min,3 次;


9. 按照 1:400 比例使用 PBS 稀释 Alexa Fluor 594 羊抗小鼠、Alexa Fluor 488 羊抗兔免疫荧光二抗,适量滴加于心脏组织切片上,室温避光孵育 1h;


10. PBST 缓冲液冲洗 5min,2 次;PBS 缓冲液冲洗 5min,3 次;


11. 含 DAPI 的封片剂进行封片,注意封片时不能有气泡产生。


C


荧光共聚焦显微镜成像


使用荧光共聚焦显微镜进行成像(图 2);


D


高内涵筛选分析系统图像采集


采用 High Content Image Processing Software 进行图像采集(图 3),流程如下:


1. 使用无水乙醇将玻片擦拭干净,晾干后置于高内涵筛选分析系统中进行图像采集与分析;

2. 打开 MetaXpress5.1 软件,选择 10 倍物镜,根据采集对象选择单个玻片采集;

3. 每个心脏组织框选 18 × 18 个视野,我们选择 DAPI、FITC、Texas Red 三个荧光通道,选取一个视野调整荧光通道参数。

4. 动态拍照状态下选择采集区域;

5. 采集图像。


详情请见下方视频


E


高内涵筛选分析系统数据分析


选择采集的图像荧光信号(图 3),选择一个视野分别对三个荧光通道进行参数调整,首先调整“All nuclei”荧光强度圈选出 DAPI 标记的细胞核,其次根据“GFP”荧光强度圈出 pH3+表达位点,最后根据“Texas Red”圈出 α-actinin 标记的心肌细胞(图 4),统计细胞核中表达 pH3 的心肌细胞数量即为增殖的心肌细胞数量(图 5)。


详情请见下方视频。


实验步骤 D 和 E 的操作视频



<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>

结果与分析

<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>

1. HE 染色展示石蜡切片机切至心脏最大面,心脏四腔室完全暴露(图 1)。


图 1.HE 染色展示心脏石蜡切片最大面


2. 使用共聚焦荧光显微镜对心脏组织切片进行成像,Z 轴扫描显示 pH3 与心肌细胞细胞核共定位(图 2)。


图 2.荧光共聚焦显微镜成像


哺乳动物出生后 1 周心肌细胞退出细胞周期(Alkass et al.,2015),因此,在小鼠出生后 1 天心肌细胞增殖旺盛,pH3+ 细胞数量较多;而小鼠出生 30 天心肌细胞几乎不再增殖,pH3+ 心肌细胞无法被检测到。


3. 高内涵筛选分析系统分别采集心脏组织切片中 DAPI、FITC、Texas Red 荧光标记的图像流程及采集的荧光信号。按照图 3A 所示流程依次设置图像采集区域,分别将 DAPI 标记的细胞核、pH3 标记的增殖点、α-actinin 标记的心肌细胞荧光信号调至清晰焦面。


图 3. 高内涵筛选分析系统图像采集流程及采集荧光图像。

A.图像采集流程界面;B.DAPI 标记的细胞核;C.pH3 标记的增殖细胞;D. α-actinin 标记的心肌细胞;E. 三通道叠加。


4. 分析采集图像的荧光信号。


在图 4 中,选择一个图像视野,分别圈出 DAPI 标记细胞核、pH3 标记细胞增殖点、α-actinin 标记心肌细胞的荧光信号。如上图所示,A(左)为分析 DAPI 标记荧光信号的参数设置,A(中)为 DAPI 标记荧光信号的采集图像,A(右)为分析 DAPI 标记荧光信号的圈选区域;B(左)为分析 pH3 标记荧光信号的参数设置,B(中)为 pH3 标记荧光信号的采集图像,B(右)为分析 pH3 标记荧光信号的圈选区域;C(左)为分析 α-actinin 标记荧光信号的参数设置,C(中)为 α-actinin 标记荧光信号的采集图像,C(右)为分析 α-actinin 标记荧光信号的圈选区域。


4. 荧光信号图像数据分析设置。

A:DAPI 荧光信号数据分析;B. pH3 荧光信号

数据分析;C. α-actinin 荧光信号数据分析。


5. 所采集图像的荧光信号分析结束后,系统自动计算 pH3+ 心肌细胞数量所占比例,格式如下:


采集图像的荧光信号分析结束后,根据 DAPI、FITC、Texas Red 三通道定位情况,计算细胞核中表达 pH3 的心肌细胞数量,得出如图 5 所示的结果。“Subtotal Profile 1XX”表示 DAPI 染细胞核的数量为 1156,“Subtotal Profile 12X”表示 DAPI 与 pH3 共定位的细胞数为 18,“Subtotal Profile 1X3”表示细胞核完整的心肌细胞数量为 103,“Subtotal Profile 123”表示细胞核表达 pH3 的心肌细胞数为 9,则增殖的心肌细胞比例为表达 pH3 的心肌细胞数量与所有的心肌细胞数量之比。


图 5. 高内涵筛选分析系统分析数据结果格式


<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>

溶液配方

<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>
<svg viewbox="0 0 1 1" style="float:left;line-height:0;width:0;vertical-align:top;"></svg>

1


1× EDTA 抗原修复液


将 50× 的 EDTA 抗原修复液 20 ml 加入到 980 ml 超纯水中配制为 1× EDTA 抗原修复液待用;


2


0.3% 封闭通透液


将 3 μl Trito™ x-100 破膜液加入到 1 ml 山羊血清封闭液中配制为 0.3% 封闭通透液;


3


PBST 缓冲液


将 23 g PBS 粉末加入到 2 L 超纯水中,搅拌至粉末全部溶解,液体澄清,为 PBS 缓冲液;将 2 ml Tween-20 加入到 PBS 缓冲液中,搅拌至澄清,为 PBST 缓冲液。


致谢

感谢中国医学科学院阜外医院心血管疾病国家重点实验室高精光学技术平台老师的大力支持。感谢国家自然科学基金面上项目(NO. 81770308)基金资助。该实验方案已在 Li et al. (2020)、Wang et al. (2020)等人发表文章中使用。


参考文献

1. Alkass, K., Panula, J., Westman, M., Wu, T.D., Guerquin-Kern, J.L. and Bergmann, O. (2015). No Evidence for Cardiomyocyte Number Expansion in Preadolescent Mice. Cell 163: 1026-1036.

2. Li, Y., Feng, J., Song, S., Li, H., Yang, H., Zhou, B., Li, Y., Yue, Z., Lian, H., Liu, L., Hu, S. and Nie, Y. (2020). gp130 Controls cardiomyocyte proliferation and heart regeneration. Circulation 142(10): 967-982.

3. Wang, Y., Li, Y., Feng, J., Liu, W., Li, Y., Liu, J., Yin, Q., Lian, H., Liu, L. and Nie, Y. (2020). Mydgf promotes Cardiomyocyte proliferation and Neonatal Heart regeneration. Theranostics 10(20): 9100-9112.




关于美谷分子仪器


Molecular Devices 始创于上世纪 80 年代美国硅谷,并在全球设有多个代表处和子公司。2005 年,Molecular Devices 在上海设立了中国代表处,2010 年加入全球科学与技术的创新者丹纳赫集团,2011 年正式成立商务公司:美谷分子仪器 (上海) 有限公司。Molecular Devices 以持续创新、快速高效、高性能的产品及完善的售后服务著称业内,我们一直致力于为客户提供在生命科学研究、制药及生物治疗开发等领域蛋白和细胞生物学的创新性生物分析解决方案。





  • 【文献分享】Sony SH800助力iPSC悬浮培养技术新突破
  • 看见不同,挑选卓越——美谷分子重磅发布 QPix FLEX 微生物克隆筛选系统
  • 从三聚氰胺到农药残留,酶标仪为食品安全保驾护航
热门搜索
Molecular Devices Sony ECHO Countstar Lonza Aperbio Stilla Seer ProteinSimple Vision Engineering ESCO 锐思捷(RSJ)
相关产品
  • ImageXpress Confocal HT.ai
    ImageXpress Confocal HT.ai
  • ImageXpress Micro 4
    ImageXpress Micro 4
  • ImageXpress Micro Confocal
    ImageXpress Micro Confocal
  • ImageXpress Pico 自动化细胞成像分析系统
    ImageXpress Pico 自动化细胞成像分析系统
品牌中心

Molecular Devices

ECHO

Countstar

ProteinSimple

Vision Engineering

ESCO

Lonza

Aperbio

Stilla

Seer

锐思捷(RSJ)

达科为(DAKEWE)

分子靶点质谱筛选服务
血浆蛋白质组高深度检测
蛋白质组差异谱质谱筛选
蛋白质互作质谱筛选
蛋白质翻译后修饰质谱筛选
小分子-靶点蛋白质谱筛选
DNA/RNA-互作蛋白质谱筛选
分子靶点质谱筛选产品
SILAC产品 (质谱级)
分子互作富集试剂盒 (质谱级)
MG系列-组合套装 (质谱级)
分子互作富集配套试剂(质谱级)
联系我们
021-36397181
info@ibiogene.cn
关注我们

© 2025 上海百翱杰生物科技有限公司 版权所有| 沪ICP备19009379号-1| 沪公网安备31011002007073号

隐私保护 网站地图

仪器维修 留言咨询
百翱杰官方微信
电话及邮件咨询
021-36397181 info@ibiogene.cn 邮件订阅

工作日:09:00-18:00

休息日:10:00-17:00