【文献分享】Sony SH800助力iPSC悬浮培养技术新突破

内容摘要

图1.悬浮培养的 hiPSCs 发生自发分化

研究团队首先发现，在常规培养条件下，悬浮培养的 hiPSCs 更容易发生自发分化，与贴壁培养的细胞相比，悬浮培养的 hiPSCs 在 10 天内表达分化标记物（如 PAX6、SOX17 和 T）的水平显著增加。通过Sony SH800S流式细胞分选仪，研究人员观察到悬浮培养的 hiPSCs 中存在不可忽视比例的 PAX6 和 SOX17 阳性细胞，而在贴壁培养条件下则未观察到荧光阳性细胞。这表明悬浮培养的 hiPSCs 部分已经发生了自发分化。

图2. PKC抑制剂抑制悬浮培养中 hiPSCs 向神经外胚层自发分化

为了抑制 hiPSCs 在悬浮培养中的自发分化，研究人员筛选了多种候选分子。结果发现，Wnt 信号通路抑制剂 IWR-1-endo 和 IWP2 能有效抑制 hiPSCs 向中内胚层分化。在添加了 IWR-1-endo 的悬浮培养条件下，T 和 SOX17 的表达水平显著降低至与贴壁培养相当的水平，而 PAX6 的表达则没有显著变化。这表明 Wnt 信号通路抑制剂能够有效抑制悬浮培养中 hiPSCs 的中内胚层分化。

图3. PKCβ 和 IWR-1-endo 对悬浮培养的 hiPSCs蛋白水平的影响

进一步的实验中，研究人员发现 PKCβ 抑制剂（如 Gö6983 和 LY333531）能有效抑制 hiPSCs 向神经外胚层分化。在同时添加 PKCβ 抑制剂和 Wnt 信号通路抑制剂的悬浮培养条件下，PAX6、T 和 SOX17 的表达水平均显著降低，而 OCT4 的表达水平则恢复至与贴壁培养相当的水平。通过流式细胞分选技术，研究人员还发现，在添加了 IWR-1-endo 和 LY333531 的悬浮培养条件下，hiPSCs 的 TRA-1-60 阳性细胞比例显著高于未添加抑制剂的对照组。这表明 PKCβ 抑制剂和 Wnt 信号通路抑制剂的联合使用能够有效维持悬浮培养中 hiPSCs 的自我更新能力。

流式分选关键应用