导读
全球水禽病毒性疾病呈现出复杂多变的态势，涉及众多病原体，对水禽养殖业造成了巨大损害。近年来，全球水禽病毒性疾病显著增加，包括鸭坦布苏病毒（DTMUV）、鸭肝炎病毒（DHV）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）和番鸭细小病毒（MDPV）的爆发。这4种新兴的水禽传染病，由于临床症状重叠，鉴别这些疾病颇具挑战性。因此，开发一步多重实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测方法是非常必要的。
文献解读：
广西大学Chenchen Wang等人近期于Microorganisms（影响因子IF：4.1）发表了一篇名为《One-Step Multiplex Real-Time Fluorescent Quantitative Reverse Transcription PCR for Simultaneous Detection of Four Waterfowl Viruses》的研究，文章开发出一种一步多重实时荧光定量逆转录PCR（qRT-PCR）检测方法，能同时检测鸭坦布苏病毒（DTMUV）、鸭肝炎病毒（DHV）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）和番鸭细小病毒（MDPV），为水禽病毒病诊断提供了有效工具。
应用亮点：
• 使用Pangaea 6快速荧光定量PCR仪器系统（Aperbio，苏州，中国）进行反应对单重和多重qRT-PCR反应体系进行优化，包括引物和探针浓度、退火温度、扩增循环数等。
• 该方法具有高特异性、敏感性和重复性，避免与其他病毒如禽腺病毒（FADV）、传染性法氏囊病病毒（IBDV）等多种病毒发生交叉反应。
• 临床样本检测结果：对326份临床样本检测发现，四种病毒均有一定阳性率，存在多种病毒共感染情况，且该方法与现有检测标准检测结果一致性高。
文章相关结果：
标准质粒pDTMUV、pDHV、pMDRV和pMDPV以最终浓度1：1：1：1混合，再进行十倍梯度稀释至最终浓度2.68×107~2.68×100拷贝/µL（每反应5.36×107~5.36×100拷贝），并建立了多重qRT-PCR标准曲线。
图例：多重qRT-PCR标准曲线
特异性、敏感性和重复性良好：该方法特异性高，对其他病毒无交叉反应；检测限为2.68×101 copies/μL ；批内和批间变异系数均小于2%。
图例：特异性测试结果
图例：敏感性测试结果
