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一步法多重荧光定量逆转录PCR检测4种水禽病毒

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2025-05-20
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导读

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全球水禽病毒性疾病呈现出复杂多变的态势,涉及众多病原体,对水禽养殖业造成了巨大损害。近年来,全球水禽病毒性疾病显著增加,包括鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肝炎病毒(DHV)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)和番鸭细小病毒(MDPV)的爆发。这4种新兴的水禽传染病,由于临床症状重叠,鉴别这些疾病颇具挑战性。因此,开发一步多重实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测方法是非常必要的。

 文献解读:

广西大学Chenchen Wang等人近期于Microorganisms(影响因子IF:4.1)发表了一篇名为《One-Step Multiplex Real-Time Fluorescent Quantitative Reverse Transcription PCR for Simultaneous Detection of Four Waterfowl Viruses》的研究,文章开发出一种一步多重实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测方法,能同时检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肝炎病毒(DHV)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)和番鸭细小病毒(MDPV),为水禽病毒病诊断提供了有效工具。

 应用亮点:

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• 使用Pangaea 6快速荧光定量PCR仪器系统(Aperbio,苏州,中国)进行反应对单重和多重qRT-PCR反应体系进行优化,包括引物和探针浓度、退火温度、扩增循环数等。

• 该方法具有高特异性、敏感性和重复性,避免与其他病毒如禽腺病毒(FADV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)等多种病毒发生交叉反应。

• 临床样本检测结果:对326份临床样本检测发现,四种病毒均有一定阳性率,存在多种病毒共感染情况,且该方法与现有检测标准检测结果一致性高。

 文章相关结果:

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标准质粒pDTMUV、pDHV、pMDRV和pMDPV以最终浓度1:1:1:1混合,再进行十倍梯度稀释至最终浓度2.68×107~2.68×100拷贝/µL(每反应5.36×107~5.36×100拷贝),并建立了多重qRT-PCR标准曲线。

图例:多重qRT-PCR标准曲线

特异性、敏感性和重复性良好:该方法特异性高,对其他病毒无交叉反应;检测限为2.68×101 copies/μL ;批内和批间变异系数均小于2%。

图例:特异性测试结果

图例:敏感性测试结果



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