【文献分享】Sony SH800S 助力解析小胶质细胞新功能

华盛顿大学研究团队^[1]通过CRISPR-Cas9基因编辑技术在Clec7a基因位点插入P2A-CreER^T2基因盒，成功生成了Clec7a-CreER^T2小鼠模型，该模型用于标记、追踪和操纵特定的小胶质细胞状态，揭示了这些状态在体内的可塑性及其在再髓鞘化过程中的作用。

主要研究内容

疾病相关的小胶质细胞（disease-associated microglia，DAMs）主要存在于衰老和神经退行性疾病中，而增殖区相关小胶质细胞（proliferative-region-associated microglia，PAMs）短暂的出现在发育期白质中。DAMs和PAMs中存在多个共同转录分子水平变化特征，其中包括C型凝集素受体Clec7a。

Clec7a-CreER^T2模型小鼠在接受他莫昔芬（TAM）诱导后，可在小胶质细胞中特异性地表达Cre重组酶，实现细胞的特异性标记、分离和操作。Clec7a-CreER^T2小鼠模型的综合表征显示小鼠在出生后早期发育过程中标记PAMs的高效性和特异性。在疾病模型中研究了DAMs在不同病理下的表现，如5xFAD阿尔茨海默病模型中，通过注射TAM，大脑皮层和海马区域标记约60%的Clec7a+小胶质细胞，且标记特异性高达98-99%。在急性脱髓鞘模型（cuprizone）和实验性自身免疫性脑脊髓炎模型（EAE）中，Clec7a-CreER^T2小鼠同样展示了高效的DAMs标记能力，并揭示了这些细胞在病理状态下的形态学和功能变化。

图1 Clec7a-CreER^T2小鼠可有效标记DAMs和PAMs

DAMs在脱髓鞘后具有形态学和转录组的可塑性，这些细胞在清除损伤的髓鞘以促进再髓鞘化过程中发挥着重要的保护作用，特异性细胞消融实验验证了DAMs在再髓鞘化中的关键作用。通过使用Clec7a-CreER^T2、LSL-DTA小鼠进行状态特异性细胞消融，发现DAMs的消失显著延缓了cuprizone诱导的再髓鞘化过程。这一结果与此前使用Trem2敲除小鼠的研究结果一致。

图2 Clec7a-CreER^T2小鼠可用于追踪活化小胶质细胞

研究团队使用索尼全自动分选仪器SH800S对标记的小胶质细胞进行高活性单细胞分选从而进行了单细胞RNA测序研究，并分析PAMs和DAMs不同环境中的基因表达特征。SH800S全自动分选仪采用创新的微流控芯片技术，实现光路和液路的全自动，温和的液流压力对脆弱细胞实现高活性分选，为单细胞测序工作的顺利进行提供了强有力的保障。

图3 小胶质细胞分选圈门策略

研究构建的Clec7a-CreER^T2小鼠模型提供了研究小胶质细胞状态的复杂动力学和功能的强大的工具，展示其在解析小胶质细胞功能及其在神经退行性疾病和髓鞘修复过程中的潜在应用价值。未来研究可以通过这一模型进一步探索小胶质细胞在其他神经疾病如肌萎缩侧索硬化症、帕金森病中的角色，揭示疾病的发病机制并寻找新的治疗靶点 。