【文献分享】SONY MA900助力高活性TIL分选

采用肿瘤浸润淋巴细胞( tumor-infiltrating Lymphocytes，TIL )的过继细胞疗法（ACT），能成功靶向肿瘤细胞突变的新抗原（Neoantigens）从而治疗某些癌症，但由于新抗原反应性T细胞比例极低和耗竭表型的高表达，让开发具有高特异性的TIL产品变得难以开展。目前常用的扩增方案，典型的像OKT3法，即没有特异性又会加剧TIL的耗竭。

美国国家癌症研究所的Sanghyun P Kim及其团队介绍了一种新抗原特异性刺激方法“NeoExpand”，用于选择性扩增新抗原反应性TIL。

该研究通过SONY MA900智能化流式细胞分选仪有效分选出更多的新抗原反应性TIL，发现分选后细胞中由于新抗原刺激，表达IL-7R、CD62L和KLF2的具有干细胞样记忆表型的TIL更多。与常规OKT3诱导扩增相比，在p53突变或KRAS突变的异种移植小鼠模型中新抗原特异性刺激的TIL表现更好的抗肿瘤疗效。

总之，NeoExpand方法选择性扩增了新抗原反应性TILs并保持其分化程度较低的干样表型，提高过继细胞疗法（ACT）的有效性，特别是针对那些具有新抗原的实体肿瘤。这对于开发新的免疫疗法具有重要意义。

作者在一项临床试验向患者回输的产品中，分析了10种不同的新抗原反应TIL。传统方法扩增后，发现这些TILs占比下降，尤其是对BTF3、p53等突变有反应性的TIL降低10倍以上，几乎无法被检测。

作者团队开发了一种体外培养方法，将TILs与抗原装载的APCs共培养，以促进新抗原反应性TCR的识别，并开发具有改善新抗原反应性、表型和功能的TIL-ACT产品，替代传统的回输产品生产方法。

作者通过携带p53R175H突变的结直肠癌患者TILs使用不同方式扩增，NeoExpand后的p53R175H反应性TILs的显著扩增。将NeoExpand TCR工程PBL（peripheral blood lymphocytes）注射到免疫缺陷的小鼠中，肿瘤生长的显著延迟。

作者通过SONY MA900进行单克隆分选后进行测序，从测序结果和流式结果证实，NeoExpand的TILs高表达干细胞样记忆细胞指标，如TCF1和CD62L等或CD39−CD69−干细胞样细胞的表型，以及低量的CD39、HAVCR2等耗竭标记物。

传统扩增方法总CD3+ T细胞的扩增倍数大于NeoExpand，然而，NeoExpand TILs显示更高的新抗原反应性T细胞的比例和扩增倍数。此外，除了已知克隆型外，NeoExpand TILs还识别出四个新的p53R175H反应性克隆型。通过NeoExpand治疗的小鼠与传统扩增产品相比，能显示出显著的肿瘤消退或生长延迟。

流式在相关研究中作用：

1. 分辨精细亚群：

例如，使用含有p53R175H表位的HLA-A02四聚体通过染色统计 TILs中的p53R175H反应性细胞数量及不同扩增方案的中该亚群差异性。

2. 分选目的细胞

通过SONY MA900识别新抗原反应性细胞并进行单克隆分选。此类细胞往往非常稀少，分选后的还需要对其进行功能性检测。因此可以证明SONY MA900分选仪对稀有细胞和弱信号的良好分辨能力，长时间分选后细胞依然保持较高活性，对分选细胞损伤更小。

肿瘤机制研究和治疗方案探索中，流式分选尤其是具备全自动高活性分选性能的SONY MA900是科研工作者的强效助力。此外，后续回输产品生产工艺中，SONY也可提供CGX10全封闭流式细胞分选系统，满足GMP生产要求，为CGT疗法赋能。总之，SONY生命科学拥有完备且性能优异的流式产品，助力生命科学持续探索。