基于ID7000™的首个小鼠高维胞内方案

细胞因子的作用：细胞因子在宿主感染或免疫后塑造先天和适应性免疫反应。

脾脏的重要性：脾脏是富含淋巴细胞（包括B细胞和T细胞）的器官，这些细胞协调宿主的免疫反应。

现有技术的局限性：尽管光谱流式细胞术和多维免疫表型分析技术已经发展，但目前还没有针对小鼠模型中Th1、Th2和Th17细胞的功能细胞因子的优化高维方案。 

光谱流式方案开发：开发了一个17参数方案，用于分析小鼠脾细胞中的主要免疫细胞亚群以及T细胞亚群、记忆表型和功能细胞因子。

细胞标记：使用CD62L和CD44标记来定义初始/记忆表型，并包括了Th1（IFNγ、TNF、IL-2）、Th2（IL-4/5）和Th17（IL-17）的标记。

实验验证：在C57BL/6和BALB/c两种小鼠品系中验证了该方案，包括稳态和体外刺激条件（如PMA和离子霉素）。

基于仪器：Sony ID7000^TM全光谱细胞分析仪，5激光147荧光通道配置。

Sony ID7000^TM全光谱细胞分析仪光学布局。

图1|使用17个参数的OMIP-111对小鼠（C57BL/6）脾脏中的免疫细胞群进行可视化的功能性细胞因子和UMAP分析的代表性门控策略。

免疫细胞亚群的识别：该方案能够识别B细胞（B-1和B-2）、NK细胞、γδT细胞、NKT细胞和γδNKT细胞，这些细胞在塑造宿主免疫中起着关键作用。

功能细胞因子的分析：在非初始/效应CD4+和CD8+ T细胞亚群中分析了Th1、Th2和Th17细胞的功能细胞因子反应。

记忆T细胞的分析：通过CD62L和CD44标记，该方案能够探索记忆T细胞亚群，并在两种小鼠品系中验证了其一致性。  

方案的适用性：该优化的多色光谱流式细胞术方案允许对小鼠T细胞亚群中的功能细胞因子进行详细的免疫表型分析，可能有助于探索这些功能细胞因子如何塑造宿主在感染或疫苗接种后的免疫反应。

方案的灵活性：该方案可以根据研究人员的具体需求进行修改和拓展。

方案的创新性：这是第一个针对小鼠脾脏中主要先天和适应性免疫细胞群以及胞内染色分析Th1、Th2和Th17细胞的优化光谱流式细胞术方案。

该研究提供了一个强大的工具，用于分析感染后或疫苗接种后小鼠模型中的免疫反应，特别是在分析功能细胞因子和记忆T细胞方面。这个工具的开发对于理解免疫反应的机制和开发新的疫苗策略具有重要意义。